Pustaka Ilmiah Universitas Padjadjaran

Abstrak

Sub-Kloning Gen α-amilase Saccharomyces fibuligera (Sfamy) Dalam Inang Escherichia coli

α-Amilase (1,4--D-glukan-4-glukanohidrolase [EC. 3.2.1.1] menghidrolisis ikatan glikosida pada pati untuk menghasilkan dekstrin dan oligosakarida yang lebih kecil. Luasnya aplikasi amilase dibidang industri menyebabkan enzim ini harus diproduksi secara rekombinan. Escherichia coli merupakan inang yang sudah umum digunakan untuk produksi protein rekombinan karena memiliki beberapa kelebihan seperti tingkat produksinya tinggi, dan media pertumbuhannya murah. Penelitian ini bertujuan untuk melakukan sub-kloning gen pengode α-amilase Saccharomycopsis fibuligera R64 (Sfamy) menggunakan vektor kloning pJET1.2. Sfamy rekombinan selanjutnya akan digunakan untuk mengekspresikan α-amilase dalam E. coli. Sfamy diamplifikasi menggunakan metoda PCR dengan penambahan sisi enzim restriksi Sap1 pada ujung 5′ dan EcoR1 pada ujung 3′. Selanjutnya, fragmen Sfamy diligasi ke sisi restriksi yang sama pada vektor pJET1.2 menghasilkan plasmid rekombinan pJET1.2-Sfamy, dan di sub-kloning ke E. coli galur Top10F’. Plasmid rekombinan dikarakterisasi dengan analisis restriksi dan penentuan urutan DNA. Hasil penelitian menunjukkan bahwa Sfamy dengan ukuran 1422 pb telah berhasil diamplifikasi dengan metoda PCR dan telah berhasil diligasikan ke vektor pJET1.2 dan sub-kloning dalam E. coli TOP10F’. Hasil analisis restriksi dan penentuan urutan DNA memperlihatkan bahwa urutan Sfamy rekombinan memiliki homologi 100% dengan Sfamy S. fibuligera R64 dengan nomor akses HQ172905 di Genebank. Gen Sfamy rekombinan yang dihasilkan dari penelitian ini dapat digunakan untuk ekspresi Sfamy di E. coli.